關(guān)鍵詞:Southern Blot服務(wù)|實驗技術(shù)服務(wù)
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Southern Blot服務(wù)|實驗技術(shù)服務(wù)——pCzn1質(zhì)粒+Arctic Express宿主菌低溫表達體系。
我們具備豐富的蛋白表達設(shè)計經(jīng)驗及實驗操作技巧，承諾客戶不成功不收費。在獲得重組蛋白產(chǎn)品的同時，我們也會提供相應(yīng)的原始數(shù)據(jù)和原始圖片,不需要再額外花費精力重復(fù)實驗。另一方面，我們所有的實驗數(shù)據(jù)真實可信，我們提供原始的表達菌株和克隆質(zhì)粒，客戶可以依據(jù)我們的實驗報告重復(fù)我們的實驗結(jié)果。
產(chǎn)品品牌：Southern Blot服務(wù)|實驗技術(shù)服務(wù)   http://www.shijichina.com/goodsid/fenleiyi/2868603/1.html
測序?qū)嶒灹鞒蹋?br> 一、 待測核酸樣品的制備
(一)制備待測DNA
基因組DNA是從動物組織(或)細胞制備。1.采用適當(dāng)?shù)幕瘜W(xué)試劑裂解細胞，或者用組織勻漿器研磨破碎組織中的細胞;2.用蛋白酶和RNA酶消化大部分蛋白質(zhì)和RNA;3.用有機試劑(酚/氯仿)抽提方法去除蛋白質(zhì)。
(二) DNA限制酶消化
基因組DNA很長，需要將其切割成大小不同的片段之后才能用于雜交分析，通常用限制酶消化DNA。一般選擇一種限制酶來切割DNA分子，但有時為了某些特殊的目的，分別用不同的限制酶消化基因組DNA。切割DNA的條件可根據(jù)不同目的設(shè)定，有時可采用部分和充分消化相結(jié)合的方法獲得一些具有交叉順序的DNA段。消化DNA后，加入EDTA，65℃加熱滅活限制酶,樣品即可直接進行電泳分離，必要時可進行乙醇沉淀，濃縮DNA樣品后再進行電泳分離。
基本步驟
1. 如果靶序列>5kb，則需進行脫嘌呤處理。
(1) 把凝膠浸在0.25mol/L HCl中，室溫輕輕晃動，直到溴酚藍從藍變黃。
注意:處理人類基因組DNA≤10分鐘;處理植物基因組DNA≤20分鐘。
(2) 把凝膠浸在滅菌雙蒸水中
2. 如果靶序列<5kb，則直接進行下面的步驟
(1) 把凝膠浸在變性液(0.5mol/L NaOH，1.5mol/L NaCl)中，室溫2×15分鐘，輕輕晃動。
(2) 把凝膠浸在滅菌雙蒸水中
(3) 把凝膠浸在中和液中(0.5mol/L Tris-HCl，pH7.5，1.5mol/L NaCl)，室溫2×15分鐘。
(4) 在20×SSC中平衡凝膠至少10分鐘。
結(jié)果注意:
在膜上陽性反應(yīng)呈帶狀。實驗中應(yīng)注意以下問題:轉(zhuǎn)膜必需充分，要保證DNA已轉(zhuǎn)到膜上。雜交條件及漂洗是保證陽性結(jié)果和背景反差對比好的關(guān)鍵。洗膜不充分會導(dǎo)致背景太深，洗膜過度又可能導(dǎo)致假陰性。若用到有毒物質(zhì)，必需注意環(huán)保及**。
主要應(yīng)用:
1.遺傳病診斷
2.DNA圖譜分析
3.檢測樣品中的DNA及其含量
4.PCR產(chǎn)物分析